Βελτίωση της παραγωγής μίας ανασυνδυασμένης εστεράσης του φερουλικού οξέος του Fusarium oxysporum στη μεθυλότροφη ζύμη Pichia pastoris - Κωστής, Ανδρόνικος (Εθνικό Μετσόβιο Πολυτεχνείο. Σχολή Χημικών Μηχανικών. Τομέας Σύνθεσης και Ανάπτυξης Βιομηχανικών Διαδικασιών (IV). Εργαστήριο Βιοτεχνολογίας, 2014)
Η παρούσα διπλωματική εργασία χωρίζεται σε δύο τμήματα, δεδομένου ότι πρόκειται για τη μελέτη της παραγωγής και απομόνωσης δύο ομοειδών βασικών πρωτεινών, της κουτινάσης και της εστεράσης του φερουλικού οξέος. Όσον αφορά το πρώτο μέρος, έγινε προσπάθεια για την παραγωγή και απομόνωση της πρωτείνης κουτινάσης, μέσω της διαδικασίας καλλιέργειας του μύκητα Fusarium Oxusporum στη μεθυλότροφη ζύμη Pichia pastoris. Μετά την παραλαβή του διαλύματος των καλλιεργειών και αφού ακολούθησαν διαδοχικές διηθήσεις, το διήθημα πέρασε από στήλη χρωματογραφίας με βαθμίδωση άλατος NaCl προκειμένου να φανερωθεί μέσω διαγράμματος η ύπαρξη ή μη της πρωτείνης κουτινάσης, και εν τέλει αυτή να καταπέσει και να παραληφθεί. Στη συνέχεια και αφού το διάλυμα των φιαλιδίων που θεωρητικά εμπεριείχαν τη ζητούμενη πρωτείνη τοποθετήθηκε στη διάταξη της μεθόδου sds-page, όπου με βάση τα μοριακά βάρη τους γίνονται φανερά τα είδη των υπαρχόντων πρωτεινών, διαπιστώθηκε η ανεπαρκής ποσότητα πρωτείνης που παραλήφθηκε, συγκριτικά με τις υπόλοιπες που ενυπήρχαν ως ανεπιθύμητες προσμίξεις στο διάλυμα. Στο δεύτερο μέρος και εξαιτίας της αδυναμίας μελέτης της κουτινάσης, ακολουθήθηκε η μελέτη των βέλτιστων συνθηκών κυτταρικής ανάπτυξης σε υπόστρωμα Pichia pastoris ανάλογης σε μέθοδο παραγωγής πρωτείνης, της εστεράσης του φερουλικού οξέος. Στην πρώτη σειρά μετρήσεων χρησιμοποιήθηκαν διαφορετικών τιμών pH ρυθμιστικά διαλύματα, διατηρώντας σταθερή την τροφοδοσία της μεθανόλης και την ταχύτητα ανάδευσης. Ακολούθως στη δεύτερη σειρά μετρήσεων διατηρήθηκε σταθερή τιμή pH και ταχύτητας ανάδευσης, μεταβάλλοντας ανά ζευγάρι φιαλών καλλιέργειας τη δοσολογία της μεθανόλης, ενώ κατά την τρίτη σειρά μετρήσεων μεταβλήθηκε η ταχύτητα ανάδευσης ανα ζευγάρι φιαλών, διατηρώντας pH και μεθανόλη σταθερά. Τα αποτελέσματα που εξήχθησαν συγκρίθηκαν με βιβλιογραφική μελέτη ανάλογης κυτταρικής ανάπτυξης και συμπεριφοράς πρωτείνης, της ξυλανάσης, προκειμένου να διαπιστωθεί η αρτιότητα των πειραματικών αποτελεσμάτων.